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  • 2022

    7-23

    常見問題Q1:標(biāo)記方法有哪幾種?A1:(1)切口平移法(2)隨機(jī)引物法(3)末端標(biāo)記法(4)單鏈DNA探針標(biāo)記(5)寡核苷酸探針標(biāo)記法Q2:探針標(biāo)記物的分類有幾種?A2:(1)探針標(biāo)記物有放射性核素與非放射性物質(zhì)兩種。放射性核素標(biāo)記敏感性高,可檢測pg水平的核酸,但因不易長期保存,且存在放射性污染等問題,現(xiàn)已較少應(yīng)用。(2)非放射性物質(zhì)常用的有生物素、地高X等,非放射性探針安全、穩(wěn)定、操作方便并且經(jīng)濟(jì),但敏感性較低,近年來,由于雜交信號檢測方法的改進(jìn),檢測的敏感性得到了很大提...

  • 2022

    7-23

    核酸雜交(Nucleicacidhybridization),又稱核酸分子雜交。威尼德分子雜交儀原理:是核酸變性和復(fù)性理論。雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開形成單鏈,當(dāng)理化因素消除后,具一定同源性的兩條(探針和待測核苷酸序列)單鏈在適宜的溫度及離子強(qiáng)度條件下,可按堿基互補(bǔ)配對原則特異性地復(fù)性形成雙鏈。核酸分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的二條單鏈之間進(jìn)行。分類:核酸分子雜交按作用環(huán)境不同分為固相核酸分子雜交和液相核酸分子雜交。一、固相核酸分...

  • 2022

    7-23

    硝酸纖維素膜(nitrocellulosefiltermembrane,簡稱NC膜),NC膜在NorthernBlot、SouthernBlot、WesternBlot中都需要用到,雜交技術(shù)有固相雜交和液相雜交之分。固相雜交技術(shù)目前較為常用,先將待測核酸結(jié)合到一定的固相支持物上,再與液相中的標(biāo)記探針進(jìn)行雜交。固相支持物常用硝酸纖維素膜。PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidenefluoride)是蛋白質(zhì)印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的,膜孔徑有...

  • 2022

    7-23

    Q1:PVDF膜和硝酸膜結(jié)合蛋白的原理是什么?A1:一般而言,硝酸纖維素膜是通過疏水作用來和蛋白質(zhì)相聯(lián),若反復(fù)洗幾次后,蛋白容易掉下來,效果較差。尼龍膜主要通過它膜上的正電荷和蛋白接合(注:常用的PVDF膜即帶正電荷的尼龍膜),同時(shí)也有疏水作用,但相對較弱。這樣的話,PVDF膜和蛋白接合較牢,不易脫落,效果較好。Q2:做組織樣品的westernblot的時(shí)候,處理樣品有什么訣竅?A2:必須進(jìn)行研磨、勻漿、超聲處理,蛋白質(zhì)溶解度會(huì)更好,離心要充分,膜蛋白需用更劇烈的方法抽提,低...

  • 2022

    7-23

    經(jīng)典實(shí)驗(yàn)步驟是將提取的蛋白電泳—轉(zhuǎn)膜---一抗孵育---二抗孵育---底物顯色---分析。我這幾天幾乎都在重復(fù)著這個(gè)過程,現(xiàn)在將自己試驗(yàn)過程記錄下來,和大家一起分享,希望對新手有所幫助。1.蛋白提取傳統(tǒng)方法是(1)組織稱重(2)利用液氮、研缽粉碎組織塊(3)加入RIPA緩沖液,PMSF(4)勻漿(15,000轉(zhuǎn)/分*1分鐘)維持4℃(5)加入PMSF冰上孵育30分鐘,移入離心管4℃離心15分鐘(6)上清液為細(xì)胞裂解液可分裝-20℃保存。一部分進(jìn)行Bradford比色法測定蛋白...

  • 2022

    7-21

    紫外線是指通過棱鏡將自然光分成赤、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫七色光,波長較紫色光更短的一類光線的總稱.它廣泛存在于自然界中,與人的生活密切相關(guān)。根據(jù)生物效應(yīng)的不同,將紫外線按照波長劃分為四個(gè)部分:A波段(UVA),又稱為黑斑效應(yīng)紫外線(400~315nm);B波段(UVB),又稱為紅斑效應(yīng)紫外線(315~280nm);C波段(UVC),又稱為滅菌紫外線(280~100nm);D波段(UVD),又稱為真空紫外線(VacuumeUV)(200~10nm)。很多年之前,紫外線就已被用于...

  • 2022

    7-21

    威尼德紫外交聯(lián)儀:在Northernblotting、Southernblotting、EMSA等尼龍膜、硝酸纖維素膜的交聯(lián)、Sterilization(滅菌)、DNANicking(DNA缺失)的應(yīng)用。紫外交聯(lián)技術(shù)是一種常用于材料科學(xué)和化學(xué)領(lǐng)域的重要技術(shù)手段。隨著材料研究的不斷深入,紫外交聯(lián)儀逐漸成為了廣泛應(yīng)用的分析設(shè)備。紫外交聯(lián)儀利用紫外光對材料進(jìn)行照射,通過能量的輸入和材料分子之間的相互作用,實(shí)現(xiàn)材料的共價(jià)鍵形成或斷裂。當(dāng)紫外光照射在材料上時(shí),光能激發(fā)材料內(nèi)部的電子,使...

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